色譜柱的分離機(jī)制：

　　分離機(jī)理在目前還存在著爭議，主要包括以下三個方面：

　　（1）分配機(jī)理

　　（2）離子交換

　　（3）偶極-偶極相互作用。更多的試驗(yàn)現(xiàn)象則表明HILIC色譜柱的保留機(jī)理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應(yīng)，很難將其區(qū)分開來。

　　色譜柱影響保留的主要因素：

　　普遍認(rèn)為HILIC色譜柱保留行為受到多種參數(shù)的影響，如固定相的官能團(tuán)、有機(jī)改性劑的含量、流速、柱溫、流動相緩沖體系的pH值、緩沖鹽的種類和濃度。

　　影響樣品在固定相上的保留行為的主要因素都是流動相中有機(jī)相的比例，例如乙腈的含量的增加會顯著增加樣品的保留因子。在HILIC色譜柱分離模式中，溶劑洗脫能力由弱到強(qiáng)為：丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇<甲醇<水, 流動相中水是較強(qiáng)的洗脫溶劑。一般采用乙腈-水體系作為流動相，其中水相的比例為5%-40%以保證其顯著的親水作用。將流動相中的水相用甲醇、乙醇、異丙醇代替，隨著流動相極性的減小，待測物在柱上的保留就會增強(qiáng)。